Salamat sa pagbisita sa Nature.com.Ang bersyon sa browser nga imong gigamit adunay limitado nga suporta sa CSS.Alang sa labing kaayo nga kasinatian, among girekomenda nga mogamit ka usa ka bag-ong browser (o i-disable ang Compatibility Mode sa Internet Explorer).Sa kasamtangan, aron masiguro ang padayon nga suporta, among ihatag ang site nga walay mga estilo ug JavaScript.
Ang Toxoplasma gondii usa ka intracellular protozoan parasite nga nag-modulate sa microenvironment sa nataptan nga host ug nahibal-an nga nalangkit sa insidente sa pagtubo sa tumor sa utok.Sa kini nga pagtuon, gi-hypothesize namon nga ang exosomal miRNA-21 gikan sa impeksyon sa Toxoplasma nagpasiugda sa pagtubo sa tumor sa utok.Ang mga exosome gikan sa Toxoplasma-infected BV2 microglia gihulagway ug internalization sa U87 glioma cells nakumpirma.Ang mga exosomal nga mga profile sa ekspresyon sa microRNA gisusi gamit ang mga arrays sa microRNA ug microRNA-21A-5p nga may kalabutan sa Toxoplasma gondii ug pagsunud sa tumor.Gisusi usab namo ang lebel sa mRNA sa mga gene nga may kalabutan sa tumor sa U87 glioma cells pinaagi sa pag-usab sa lebel sa miR-21 sa exosome ug ang epekto sa exosome sa human U87 glioma cell proliferation.Sa mga exosome sa U87 glioma nga mga selula nga nataptan sa Toxoplasma gondii, ang pagpahayag sa microRNA-21 nagdugang ug ang kalihokan sa antitumor genes (FoxO1, PTEN, ug PDCD4) mikunhod.Ang mga exosome nga nakuha sa BV2 nga nataptan sa Toxoplasma nag-aghat sa pagdaghan sa mga selula sa glioma sa U87.Ang mga exosome nag-aghat sa pagtubo sa mga selula sa U87 sa usa ka modelo sa tumor sa mouse.Gisugyot namon nga ang pagtaas sa exosomal miR-21 sa Toxoplasma-infected BV2 microglia mahimo’g adunay hinungdanon nga papel ingon usa ka tigpasiugda sa pagtubo sa cell sa mga selula sa glioma sa U87 pinaagi sa pagpaubos sa mga gene sa antitumor.
Gibanabana nga labaw pa sa 18.1 milyon nga mga kaso sa advanced cancer ang nadayagnos sa tibuuk kalibutan kaniadtong 2018, nga adunay mga 297,000 nga tumor sa sentral nga sistema sa nerbiyos nga nadayagnos matag tuig (1.6% sa tanan nga mga tumor)1.Gipakita sa miaging panukiduki nga ang mga hinungdan sa peligro sa pagpalambo sa mga tumor sa utok sa tawo naglakip sa lainlaing mga produkto sa kemikal, kasaysayan sa pamilya, ug ionizing radiation gikan sa mga kagamitan sa pagtambal sa ulo ug diagnostic.Bisan pa, ang eksaktong hinungdan sa kini nga mga malignancies wala mahibal-an.Gibana-bana nga 20% sa tanan nga mga kanser sa tibuok kalibutan tungod sa makatakod nga mga ahente, lakip ang mga virus, bakterya ug mga parasito3,4.Ang makatakod nga mga pathogen makabalda sa genetic nga mekanismo sa host cell, sama sa pag-ayo sa DNA ug sa cell cycle, ug mahimong mosangpot sa laygay nga panghubag ug kadaot sa immune system5.
Ang makatakod nga mga ahente nga nalangkit sa kanser sa tawo mao ang labing komon nga viral pathogens, lakip na ang human papillomaviruses ug hepatitis B ug C virus.Ang mga parasito mahimo usab nga adunay potensyal nga papel sa pag-uswag sa kanser sa tawo.Pipila ka matang sa parasito, nga mao ang Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis ug Hymenolepis nana, nalambigit sa lain-laing mga matang sa kanser sa tawo 6,7,8.
Ang Toxoplasma gondii usa ka intracellular protozoan nga nag-regulate sa microenvironment sa mga nataptan nga host cells.Kini nga parasito gibana-bana nga makatakod sa gibana-bana nga 30% sa populasyon sa kalibutan, nga nagbutang sa tibuok populasyon sa peligro9,10.Ang Toxoplasma gondii mahimong makatakod sa mga importanteng organo, lakip ang sentral nga sistema sa nerbiyos (CNS), ug makapahinabog seryosong mga sakit sama sa makamatay nga meningitis ug encephalitis, ilabina sa mga pasyente nga immunocompromised9.Bisan pa, ang Toxoplasma gondii mahimo usab nga magbag-o sa palibot sa nataptan nga host pinaagi sa pag-modulate sa pagtubo sa cell ug mga tubag sa immune sa mga immunocompetent nga mga indibidwal, nga mosangput sa pagpadayon sa usa ka asymptomatic chronic infection9,11.Makaiikag, tungod sa correlation tali sa T. gondii prevalence ug brain tumor incidence, ang pipila ka mga taho nagsugyot nga sa vivo host nga mga kausaban sa kinaiyahan tungod sa chronic T. gondii infection susama sa tumor microenvironment.
Ang mga exosome nailhan nga intercellular communicators nga naghatud sa biological content, lakip ang mga protina ug nucleic acid, gikan sa silingang mga selula16,17.Ang mga exosome mahimong makaimpluwensya sa biolohikal nga mga proseso nga may kalabutan sa tumor sama sa anti-apoptosis, angiogenesis, ug metastasis sa tumor microenvironment.Sa partikular, ang mga miRNA (miRNAs), gagmay nga mga non-coding nga RNA nga mga 22 ka nucleotides ang gitas-on, hinungdanon nga post-transcriptional gene regulators nga nagkontrol sa labaw sa 30% sa mRNA sa tawo pinaagi sa miRNA-induced silencing complex (miRISC).Ang Toxoplasma gondii mahimong makabalda sa biolohikal nga mga proseso pinaagi sa pagkontrolar sa miRNA nga ekspresyon sa mga nataptan nga panon.Ang host miRNAs adunay importante nga mga signal para sa pag-regulate sa host biological nga mga proseso aron makab-ot ang estratehiya sa survival sa parasito.Sa ingon, ang pagtuon sa mga pagbag-o sa profile sa host miRNA sa impeksyon sa T. gondii makatabang kanato nga masabtan ang interaksyon tali sa host ug T. gondii nga mas klaro.Sa pagkatinuod, Thirugnanam et al.Gisugyot sa 15 nga ang T. gondii nagpasiugda sa carcinogenesis sa utok pinaagi sa pag-usab sa ekspresyon niini sa piho nga host miRNA nga may kalabutan sa pagtubo sa tumor ug nakit-an nga ang T. gondii mahimong hinungdan sa mga glioma sa mga hayop nga eksperimento.
Kini nga pagtuon nagpunting sa pagbag-o sa exosomal miR-21 sa host microglia nga nataptan sa Toxoplasma BV2.Nakita namon ang usa ka posible nga papel sa giusab nga exosomal miR-21 sa pagtubo sa U87 glioma cells tungod sa pagpabilin sa nucleus sa FoxO1 / p27, nga mao ang target sa overexpressed miR-21.
Ang mga exosome nga nakuha gikan sa BV2 nakuha gamit ang differential centrifugation ug gi-validate sa lainlaing mga pamaagi aron malikayan ang kontaminasyon sa mga sangkap sa cellular o uban pang mga vesicle.Ang SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) nagpakita sa lahi nga mga sumbanan tali sa mga protina nga gikuha gikan sa BV2 nga mga selula ug mga exosome (Figure 1A), ug ang mga sample gisusi alang sa presensya sa Alix, nga gisusi sa Western blotting sa exosomal protein markers sa.Ang pag-label sa Alix nakit-an sa mga exosome nga protina apan dili sa BV2 cell lysate protein (Fig. 1B).Dugang pa, ang giputli nga RNA gikan sa mga exosome nga nakuha gikan sa BV2 gisusi gamit ang usa ka bioanalyzer.Ang 18S ug 28S ribosomal subunits panagsa ra naobserbahan sa exosomal RNA migration pattern, nga nagpakita sa kasaligan nga kaputli (Figure 1C).Sa katapusan, ang transmission electron microscopy nagpakita nga ang naobserbahan nga mga exosome mga 60-150 nm ang gidak-on ug adunay usa ka cup-like structure nga tipikal sa exosome morphology (Fig. 1D).
Paghulagway sa mga exosome nga nakuha gikan sa mga selula sa BV2.(A) Panid sa panid sa datos sa kaluwasan.Ang mga protina gilain gikan sa mga selula sa BV2 o mga exosome nga nakuha gikan sa BV2.Ang mga pattern sa protina lahi sa taliwala sa mga selula ug mga exosome.(B) Western blot analysis sa usa ka exosomal marker (Alix).(C) Pagtimbang-timbang sa giputli nga RNA gikan sa BV2 cells ug BV2 nga nakuha nga mga exosome gamit ang bioanalyzer.Busa, ang 18S ug 28S ribosomal subunits sa BV2 cells panagsa ra makita sa exosomal RNA.(D) Transmission electron microscopy nagpakita nga ang mga exosome nga nahimulag gikan sa BV2 nga mga selula negatibo nga namansahan sa 2% uranyl acetate.Ang mga exosome gibana-bana nga 60-150 nm ang gidak-on ug pormag tasa (Song ug Jung, wala mamantala nga datos).
Ang cellular internalization sa BV2-derived exosome ngadto sa U87 human glioma cells naobserbahan gamit ang confocal microscopy.Ang PKH26 nga gimarkahan nga mga exosome gi-localize sa cytoplasm sa mga selula sa U87.Ang nuclei gibulingan sa DAPI (Fig. 2A), nga nagpakita nga ang BV2-derived exosome mahimong ma-internalize sa host cells ug makaimpluwensya sa palibot sa recipient cells.
Ang internalization sa BV2-derived exosome ngadto sa U87 glioma cells ug BV2-derived exosome nga nataptan sa Toxoplasma RH nga gipahinabo sa pagdaghan sa U87 glioma cells.(A) Exosome nga gilamoy sa U87 nga mga selula nga gisukod sa confocal microscopy.Ang mga selula sa glioma sa U87 gilumlom sa mga exosome nga gimarkahan sa PKH26 (pula) o walay kontrol sulod sa 24 ka oras.Ang nuclei namansahan sa DAPI (asul) ug dayon giobserbahan ubos sa confocal microscope (scale bar: 10 μm, x 3000).(B) U87 glioma cell proliferation gitino pinaagi sa cell proliferation assay.Ang mga selula sa U87 glioma gitambalan sa mga exosome alang sa gipakita nga oras. *P <0.05 nakuha pinaagi sa Student's t test. *P <0.05 nakuha pinaagi sa Student's t test. *P <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P <0.05 pinaagi sa t-test sa Estudyante. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 nakuha gamit ang Student's t-test.
Human makumpirma ang internalization sa BV2-derived exosome ngadto sa U87 glioma cells, among gihimo ang cell proliferation assays aron imbestigahan ang papel sa BV2-derived Toxoplasma-derived exosome sa pagpalambo sa human glioma cells.Ang pagtambal sa mga U87 nga mga selula nga adunay mga exosome gikan sa T. gondii-infected BV2 cells nagpakita nga ang T. gondii-infected BV2-derived exosome maoy hinungdan sa mas taas nga proliferation sa U87 cells kumpara sa control (Fig. 2B).
Dugang pa, ang pagtubo sa mga selula sa U118 adunay parehas nga mga resulta sama sa U87, tungod kay ang Toxoplasma nga gipukaw ang mga exosome hinungdan sa labing taas nga lebel sa pagdaghan (wala gipakita ang datos).Pinasukad sa kini nga mga datos, mahimo naton ipakita nga ang mga exosome nga nataptan sa Toxoplasma nga nakuha sa BV2 adunay hinungdanon nga papel sa pagdaghan sa glioma cell.
Aron imbestigahan ang epekto sa Toxoplasma-infected BV2-derived exosome sa tumor development, among gi-injected ang U87 glioma cells ngadto sa hubo nga mga ilaga para sa xenograft model ug gi-injected ang BV2-derived exosome o RH-infected BV2-derived exosome.Human makita ang mga tumor pagkahuman sa 1 ka semana, ang matag eksperimento nga grupo sa 5 nga mga ilaga gibahin sumala sa gidak-on sa tumor aron mahibal-an ang parehas nga punto sa pagsugod, ug ang gidak-on sa tumor gisukod sa 22 ka adlaw.
Sa mga ilaga nga adunay U87 xenograft nga modelo, ang mas dako nga tumor nga gidak-on ug gibug-aton naobserbahan sa BV2 nga nakuha nga RH-infected exosome nga grupo sa adlaw nga 22 (Fig. 3A, B).Sa laing bahin, wala'y mahinungdanong kalainan sa gidak-on sa tumor tali sa BV2-derived exosome group ug sa control group human sa exosome nga pagtambal.Dugang pa, ang mga ilaga nga gi-injected sa glioma cells ug exosomes biswal nga nagpakita sa pinakadako nga tumor volume sa grupo sa RH-infected BV2-derived exosome (Fig. 3C).Gipakita niini nga mga resulta nga ang BV2-derived Toxoplasma-infected exosome nagduso sa pagtubo sa glioma sa usa ka mouse tumor model.
Oncogenesis (AC) sa BV2 nga nakuha nga exosome sa usa ka U87 xenograft mouse model.Ang gidak-on sa tumor (A) ug gibug-aton (B) dako nga nadugangan sa BALB/c nude nga mga ilaga nga gitambalan sa RH-infected exosome nga nakuha gikan sa BV2.Ang BALB / c hubo nga mga ilaga (C) gi-injected subcutaneously sa 1 x 107 U87 nga mga selula nga gisuspinde sa Matrigel mixture.Unom ka adlaw pagkahuman sa indeyksiyon, ang 100 μg sa BV2 nga nakuha nga mga exosome gitambalan sa mga ilaga.Ang gidak-on ug gibug-aton sa tumor gisukod sa gipakita nga mga adlaw ug pagkahuman sa pagsakripisyo, matag usa. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05.
Gipakita sa datos nga ang 37 miRNAs (16 overexpressed ug 21 downexpressed) nga nalangkit sa immunity o tumor development dako nga nausab sa microglia human sa impeksyon sa Toxoplasma RH strain (Fig. 4A).Ang mga relatibong lebel sa ekspresyon sa miR-21 taliwala sa giusab nga mga miRNA gipamatud-an sa real-time nga RT-PCR sa mga exosome nga nakuha gikan sa BV2, mga exosome nga gitambalan sa BV2 ug U87 nga mga selula.Ang ekspresyon sa miR-21 nagpakita sa usa ka mahinungdanon nga pagtaas sa mga exosome gikan sa mga selula sa BV2 nga nataptan sa Toxoplasma gondii (RH strain) (Fig. 4B).Ang mga lebel sa relatibong ekspresyon sa miR-21 sa BV2 ug U87 nga mga selula misaka human sa uptake sa giusab nga mga exosome (Fig. 4B).Ang paryente nga lebel sa miR-21 nga ekspresyon sa mga tisyu sa utok sa mga pasyente sa tumor ug mga ilaga nga nataptan sa Toxoplasma gondii (ME49 strain) mas taas kay sa mga kontrol, matag usa (Fig. 4C).Kini nga mga resulta nahiuyon sa mga kalainan tali sa lebel sa ekspresyon sa gitagna ug gikumpirma nga mga microRNA sa vitro ug sa vivo.
Mga pagbag-o sa ekspresyon sa exosomal miP-21a-5p sa microglia nga nataptan sa Toxoplasma gondii (RH).(A) Nagpakita ug mahinungdanong mga kausaban sa siRNA nga nalangkit sa imyunidad o paglambo sa tumor human sa impeksyon sa T. gondii RH.(B) Relative miR-21 nga lebel sa ekspresyon nakit-an sa real-time nga RT-PCR sa BV2-derived exosome, BV2-treated exosome, ug U87 cells.(C) Relative miR-21 nga lebel sa ekspresyon nakit-an sa mga tisyu sa utok sa mga pasyente nga tumor (N = 3) ug mga ilaga nga nataptan sa Toxoplasma gondii (ME49 strain) (N = 3). *P <0.05 nakuha pinaagi sa Student's t test. *P <0.05 nakuha pinaagi sa Student's t test. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 nakuha gamit ang Student's t-test. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 nakuha gamit ang Student's t-test.
Ang mga exosome gikan sa RH-infected BV2 cells misangpot sa pagtubo sa gliomas sa vivo ug in vitro (Fig. 2, 3).Aron mahibal-an ang mga may kalabotan nga mRNA, among gisusi ang lebel sa mRNA sa mga target nga gen sa antitumor, kahon sa forkhead O1 (FoxO1), PTEN, ug giprograma nga pagkamatay sa cell 4 (PDCD4) sa mga selula sa U87 nga nataptan sa mga exosome nga nakuha gikan sa BV2 o RH BV2.Gipakita sa pag-analisa sa bioinformatics nga daghang mga gene nga may kalabotan sa tumor, lakip ang mga gene sa FoxO1, PTEN, ug PDCD4, adunay miR-2121,22 nga mga binding site.Ang lebel sa mRNA sa antitumor target nga mga gene gipakunhod sa RH-infected BV2-derived exosome kumpara sa BV2-derived exosome (Fig. 5A).Ang FoxO1 nagpakita sa pagkunhod sa lebel sa protina sa RH-infected BV2-derived exosome kumpara sa BV2-derived exosome (Figure 5B).Pinasukad sa kini nga mga resulta, makumpirma namon nga ang mga exosome nga nakuha gikan sa RH-infected BV2 nagpaubos sa mga anti-oncogenic nga mga gene, nga nagpadayon sa ilang papel sa pagtubo sa tumor.
Ang Toxoplasma RH-infected BV2-derived exosome nag-aghat sa pagsumpo sa antitumor genes sa U87 glioma cells pinaagi sa Toxoplasma RH-infected BV2-derived exosome.(A) Real-time nga PCR sa FoxO1, PTEN ug PDCD4 nga ekspresyon sa mga exosome nga nakuha gikan sa T. gondii RH-infected BV2 kumpara sa PBS exosome.Ang β-actin mRNA gigamit isip kontrol.(B) Ang ekspresyon sa FoxO1 gitino sa Western blotting ug ang densitometry nga datos gisusi sa istatistika gamit ang programa sa ImageJ. *P <0.05 nakuha pinaagi sa Student's t test. *P <0.05 nakuha pinaagi sa Student's t test. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 nakuha gamit ang Student's t-test. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 nakuha gamit ang Student's t-test.
Aron masabtan ang epekto sa miP-21 sa mga exosome sa regulasyon sa gene nga may kalabutan sa tumor, ang mga selula sa U87 gibalhin sa usa ka tigpugong sa miP-21 gamit ang Lipofectamine 2000 ug ang mga selula giani 24 ka oras human sa pagbalhin.Ang lebel sa ekspresyon sa FoxO1 ug p27 sa mga selula nga gibalhin sa miR-21 nga mga inhibitor gitandi sa mga selula nga gitambalan sa BV2-derived exosomes gamit ang qRT-PCR (Fig. 6A, B).Ang pagbalhin sa miR-21 inhibitor ngadto sa U87 nga mga selyula mahinungdanon nga nagpaubos sa FoxO1 ug p27 nga ekspresyon (FIG. 6).
RH-infected exosomal BV2-nakuha miP-21 giusab FoxO1/p27 ekspresyon sa U87 glioma cells.Ang mga selula sa U87 gibalhin sa miP-21 inhibitor gamit ang Lipofectamine 2000 ug ang mga selula giani 24 ka oras human sa pagbalhin.Ang lebel sa ekspresyon sa FoxO1 ug p27 sa mga selula nga gibalhin sa miR-21 nga mga inhibitor gitandi sa mga lebel sa mga selula nga gitambalan sa BV2-derived exosome gamit ang qRT-PCR (A, B).
Aron makalingkawas sa immune response sa host, ang Toxoplasma parasite mausab ngadto sa tissue cyst.Gi-parasitize nila ang lainlaing mga tisyu, lakip ang utok, kasingkasing, ug kaunuran sa kalabera, sa tibuok kinabuhi sa host ug modulate ang immune response sa host.Dugang pa, mahimo nilang i-regulate ang cell cycle ug apoptosis sa mga host cells, nga nagpasiugda sa ilang pagdaghan14,24.Ang Toxoplasma gondii kasagarang makaapektar sa host dendritic cells, neutrophils, ug monocyte/macrophage lineage, lakip ang brain microglia.Ang Toxoplasma gondii nag-aghat sa pagkalainlain sa mga macrophage sa M2 phenotype, nakaapekto sa pagkaayo sa samad pagkahuman sa impeksyon sa pathogen, ug nalambigit usab sa hypervascularization ug granulomatous fibrosis.Kini nga pathogenesis sa pamatasan sa impeksyon sa Toxoplasma mahimong adunay kalabotan sa mga marker nga adunay kalabotan sa pag-uswag sa tumor.Ang dili maayo nga palibot nga gi-regulate sa Toxoplasma mahimong susama sa katugbang nga precancer.Busa, kini mahimong gituohan nga Toxoplasma impeksyon kinahanglan nga makatampo sa pagpalambo sa mga tumor sa utok.Sa tinuud, taas nga rate sa impeksyon sa Toxoplasma ang gitaho sa serum sa mga pasyente nga adunay lainlaing mga tumor sa utok.Dugang pa, ang Toxoplasma gondii mahimo nga lain nga carcinogenic effector ug molihok nga synergistically aron matabangan ang uban nga makatakod nga mga carcinogen nga makapalambo sa mga tumor sa utok.Niining bahina, angay nga matikdan nga ang P. falciparum ug Epstein-Barr virus synergistically nakatampo sa pagporma sa Burkitt's lymphoma.
Ang papel sa mga exosome isip mga regulator sa natad sa panukiduki sa kanser kaylap nga gisusi.Bisan pa, ang papel sa mga exosome tali sa mga parasito ug mga nataptan nga host nagpabilin nga dili kaayo masabtan.Sa pagkakaron, lain-laing mga regulators, lakip na ang mga tinago nga mga protina, nagpatin-aw sa biolohikal nga mga proseso diin ang mga protozoan parasites mosukol sa pag-atake sa host ug magpadayon sa impeksyon.Bag-ohay lang, adunay nagkadako nga konsepto nga ang mga microvesicle nga may kalabotan sa protozoan ug ang ilang mga microRNA nakig-uban sa mga host cell aron makahimo usa ka paborableng palibot alang sa ilang pagkaluwas.Busa, dugang nga mga pagtuon ang gikinahanglan aron madiskobrehan ang relasyon tali sa giusab nga exosomal miRNAs ug glioma cell proliferation.MicroRNA alteration (cluster genes miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 ug miR-17-92) nagbugkos sa STAT3 promoter sa toxoplasma-infected human macrophage, gi-regulate ug nag-aghat sa anti -apoptosis agig tubag sa impeksyon sa Toxoplasma gondii 29 .Ang impeksyon sa Toxoplasma nagdugang sa pagpahayag sa miR-17-5p ug miR-106b-5p, nga nalangkit sa daghang mga sakit nga hyperproliferative 30 .Kini nga mga datos nagsugyot nga ang host miRNA nga gi-regulate sa impeksyon sa Toxoplasma hinungdanon nga mga molekula alang sa pagkaluwas sa parasito ug pathogenesis sa biological nga pamatasan sa host.
Ang mga giusab nga miRNA mahimong makaimpluwensya sa lainlaing mga lahi sa pamatasan sa panahon sa pagsugod ug pag-uswag sa mga malignant nga mga selyula, lakip ang mga glioma: pagkabuotan sa kaugalingon sa mga signal sa pagtubo, pagkadili sensitibo sa mga signal nga nagpugong sa pagtubo, paglikay sa apoptosis, walay kinutuban nga potensyal sa pagkopya, angiogenesis, pagsulong ug metastasis, ug panghubag.Sa glioma, ang giusab nga mga miRNA nahibal-an sa daghang mga pagtuon sa profile sa ekspresyon.
Sa kasamtangan nga pagtuon, among gikumpirma ang taas nga lebel sa miRNA-21 nga ekspresyon sa toxoplasma-infected host cells.Ang miR-21 giila nga usa sa labing kanunay nga gipahayag nga mga microRNA sa mga solidong tumor, lakip ang gliomas, 33 ug ang ekspresyon niini nahiuyon sa grado sa glioma.Ang pagtipon nga ebidensya nagsugyot nga ang miR-21 usa ka nobela nga oncogene nga naglihok ingon usa ka anti-apoptotic nga hinungdan sa pagtubo sa glioma ug labi nga gipahayag sa mga tisyu ug plasma sa mga malignancies sa utok sa tawo.Makapainteres, ang dili aktibo nga miR-21 sa mga selyula ug tisyu sa glioma nag-aghat sa pagpugong sa pagdaghan sa cell tungod sa apoptosis nga nagsalig sa caspase.Ang bioinformatic analysis sa miR-21 nga gitagna nga mga target nagpadayag sa daghang tumor suppressor genes nga may kalabutan sa apoptosis pathways, lakip na ang programmed cell death 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, ug forkhead box O1 (FoxO1), nga adunay miR-2121 binding site..22.38.
Ang FoxO1, isip usa sa mga transcription factor (FoxO), nalangkit sa pagpalambo sa nagkalain-laing matang sa kanser sa tawo ug maka-regulate sa ekspresyon sa tumor suppressor genes sama sa p21, p27, Bim, ug FasL40.Ang FoxO1 makagapos ug makapaaktibo sa mga inhibitor sa siklo sa selula sama sa p27 aron mapugngan ang pagtubo sa selula.Dugang pa, ang FoxO1 usa ka yawe nga epekto sa PI3K / Akt nga pagsenyas ug nag-regulate sa daghang mga biological nga proseso sama sa pag-uswag sa siklo sa cell ug pagkalainlain sa cell pinaagi sa pagpaaktibo sa transkripsyon sa p2742.
Sa konklusyon, kami nagtuo nga ang exosomal miR-21 nga nakuha gikan sa Toxoplasma-infected microglia mahimong adunay importante nga papel isip growth regulator sa glioma cells (Fig. 7).Bisan pa, gikinahanglan ang dugang nga mga pagtuon aron makit-an ang usa ka direktang sumpay tali sa exosomal miR-21, giusab nga impeksyon sa Toxoplasma, ug pagtubo sa glioma.Kini nga mga resulta gilauman nga maghatag usa ka punto sa pagsugod sa pagtuon sa relasyon tali sa impeksyon sa Toxoplasma ug sa insidente sa glioma.
Usa ka schematic diagram sa mekanismo sa glioma (utok) carcinogenesis gisugyot niini nga pagtuon.Ang tagsulat nagdrowing sa PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
Ang tanan nga mga eksperimento nga protocol niini nga pagtuon, lakip ang paggamit sa mga hayop, nahiuyon sa Seoul National University Animal Care ug User Committee Standard Ethical Guidelines ug gi-aprobahan sa Institutional Review Board sa Seoul National University School of Medicine (IRB number SNU- 150715).-2).Ang tanan nga mga pamaagi sa eksperimento gihimo subay sa mga rekomendasyon sa ARRIVE.
Ang BV2 mouse microglia ug U87 human glioma cells gi-culture sa Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) ug Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene), matag usa, nga adunay 10% fetal bovine serum, 4 mM l- glutamine, 0.2 mM penicillin ug 0.05 mM streptomycin.Ang mga selula gikultura sa usa ka incubator nga adunay 5% CO2 sa 37 ° C.Ang laing linya sa glioma cell, U118, gigamit alang sa pagtandi sa mga selula sa U87.
Aron ihimulag ang mga exosome gikan sa T. gondii-infected RH ug ME49 strains, T. gondii tachyzoites (RH strain) gikuha gikan sa tiyan nga lungag sa 6-semana nga BALB/c nga mga ilaga nga gi-inject 3-4 ka adlaw sa wala pa.Ang mga tachyzoites gihugasan sa tulo ka beses sa PBS ug giputli pinaagi sa centrifugation sa 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43.Aron makuha ang mga tachyzoites sa strain ME49, ang BALB / c nga mga ilaga gi-intraperitoneally nga gi-injected sa 20 tissue cysts ug ang tachyzoite nga pagbag-o sa mga cyst nakolekta pinaagi sa paghugas sa lungag sa tiyan sa 6-8th nga adlaw human sa impeksyon (PI).Ang mga ilaga nataptan sa PBS.Ang ME49 tachyzoites gipatubo sa mga selula nga gidugangan sa 100 μg/ml penicillin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL), ug 5% fetal bovine serum (Lonza, Walkersville, MD) .., USA) sa 37 °C ug 5% nga carbon dioxide.Human sa kultibasyon sa mga selula sa Vero, ang ME49 tachyzoites gipasa sa makaduha pinaagi sa usa ka 25 gauge nga dagom ug dayon pinaagi sa usa ka 5 µm filter aron makuha ang mga tinumpag ug mga selula.Human sa paghugas, ang mga tachyzoites gisuspinde pag-usab sa PBS44.Ang mga tissue cyst sa Toxoplasma gondii strain ME49 gipadayon pinaagi sa intraperitoneal injection sa mga cyst nga nahimulag gikan sa utok sa nataptan nga C57BL/6 nga mga ilaga (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea).Ang utok sa ME49-infected nga mga ilaga giani human sa 3 ka bulan sa PI ug gimina sa ilawom sa mikroskopyo aron mahimulag ang mga cyst.Ang mga nataptan nga ilaga gitago sa ilawom sa espesyal nga kondisyon nga wala’y pathogen (SPF) sa Seoul National University School of Medicine.
Ang kinatibuk-ang RNA gikuha gikan sa BV2-derived exosome, BV2 cells ug tissue gamit ang miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) sumala sa mga instruksyon sa tiggama, lakip na ang oras sa paglumlum alang sa lakang sa elution.Ang konsentrasyon sa RNA gitino sa usa ka NanoDrop 2000 spectrophotometer.Ang kalidad sa RNA microarrays gisusi gamit ang Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Netherlands).
Ang DMEM nga adunay 10% exosome-poor FBS giandam pinaagi sa ultracentrifugation sa 100,000g alang sa 16 ka oras sa 4 ° C ug gisala pinaagi sa usa ka 0.22 µm filter (Nalgene, Rochester, NY, USA).Ang mga selula sa BV2, 5 × 105, gi-kultura sa DMEM nga adunay 10% exosome-depleted FBS ug 1% antibiotics sa 37 ° C ug 5% CO2.Human sa 24 ka oras nga paglumlum, ang mga tachyzoites sa strain RH o ME49 (MOI = 10) gidugang ngadto sa mga selula ug ang mga non-invading parasites gikuha sulod sa usa ka oras ug gipuno sa DMEM.Ang mga exosome gikan sa mga selula sa BV2 gilain pinaagi sa giusab nga differential centrifugation, ang labing kaylap nga gigamit nga pamaagi.I-resuspend ang exosome pellet sa 300 µl PBS para sa RNA o pagtuki sa protina.Ang konsentrasyon sa nahilit nga mga exosome gitino gamit ang BCA protein assay kit (Pierce, Rockford, IL, USA) ug usa ka NanoDrop 2000 spectrophotometer.
Ang mga precipitates gikan sa BV2 cells o exosomes nga nakuha gikan sa BV2 gi-lysed sa PRO-PREP ™ protein extraction solution (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) ug ang mga protina gikarga sa Coomassie brilliant blue stained 10% SDS polyacrylamide gels.Dugang pa, ang mga protina gibalhin sa mga lamad sa PVDF sulod sa 2 ka oras.Ang Western blots gi-validate gamit ang Alix antibody (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) isip exosomal marker.Ang HRP-conjugated goat anti-mouse IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) ug usa ka LAS-1000 plus luminescent image analyzer (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) gigamit isip secondary antibody..Ang transmission electron microscopy gihimo aron tun-an ang gidak-on ug morpolohiya sa mga exosome.Ang mga exosome nga nahimulag gikan sa mga selula sa BV2 (6.40 µg/µl) giandam sa carbon-coated meshes ug negatibo nga gimantsa sa 2% uranyl acetate sulod sa 1 min.Ang giandam nga mga sample naobserbahan sa usa ka paspas nga boltahe sa 80 kV gamit ang JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japan) nga adunay ES1000W Erlangshen CCD camera (Gatan, Pleasanton, CA, USA).
Ang mga exosome nga nakuha sa BV2 gipintalan gamit ang PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) sulod sa 15 minutos sa temperatura sa lawak.Ang mga selula sa U87, 2 × 105, nga adunay PKH26-label nga mga exosome (pula) o walay exosome isip negatibo nga kontrol, gilumlom sa 37 ° C sulod sa 24 ka oras sa 5% CO2 incubator.Ang U87 cell nuclei gipintalan sa DAPI (asul), ang U87 nga mga selula gitakda sa 4% paraformaldehyde alang sa 15 min sa 4 ° C ug dayon gisusi sa usa ka Leica TCS SP8 STED CW confocal microscope system (Leica Microsystems, Mannheim, Germany).maobserbahan.
Ang cDNA gi-synthesize gikan sa siRNA gamit ang Mir-X siRNA first strand synthesis ug SYBR qRT-PCR kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japan).Ang real time quantitative PCR gihimo gamit ang iQ5 real time PCR detection system (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) gamit ang mga primer ug templates nga gisagol sa SYBR Premix.Ang DNA gipadako alang sa 40 nga mga siklo sa denaturation sa 95 ° C sa 15 s ug annealing sa 60 ° C sa 60 s.Ang datos gikan sa matag reaksyon sa PCR gisusi gamit ang data analysis module sa iQ™5 optical system software (Bio-Rad).Ang mga relatibong pagbag-o sa ekspresyon sa gene tali sa pinili nga target nga mga gene ug β-actin/siRNA (ug U6) gikalkulo gamit ang standard curve method.Ang mga primerong sequence nga gigamit gipakita sa Table 1.
Ang 3 x 104 U87 glioma nga mga selula gisabod sa 96-well plates ug gisagol sa Toxoplasma-infected exosome nga nakuha gikan sa BV2 (50 μg / mL) o nonpulse exosome nga nakuha gikan sa BV2 (50 μg / mL) isip kontrol sa 12, 18 ug 36 ka oras .Ang gidaghanon sa pagdaghan sa selula gitino gamit ang Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) (Supplementary Figures S1-S3) 46.
Ang 5-ka-semana nga babaye nga BALB/c nga hubo nga mga ilaga gipalit gikan sa Orient Bio (Seongnam-si, South Korea) ug gitago sa tagsa-tagsa sa sterile nga mga hawla sa temperatura sa lawak (22 ± 2 ° C) ug humidity (45 ± 15 ° C).%) sa temperatura sa lawak (22±2°C) ug humidity (45±15%).Usa ka 12-oras nga siklo sa kahayag ug usa ka 12-oras nga ngitngit nga siklo gihimo ubos sa SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center).Ang mga ilaga random nga gibahin sa tulo ka mga grupo sa 5 nga mga ilaga matag usa ug ang tanan nga mga grupo gi-injected subcutaneously nga adunay 400 ml nga PBS nga adunay sulud nga 1 x 107 U87 glioma cells ug ang hinungdan sa pagtubo nga pagkunhod sa BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, USA).Unom ka adlaw pagkahuman sa pag-injection sa tumor, ang 200 mg nga exosome nga nakuha gikan sa mga selula sa BV2 (nga adunay / walay impeksyon sa Toxoplasma) gi-inject sa lugar sa tumor.Kaluhaan ug duha ka adlaw human sa impeksyon sa tumor, ang gidak-on sa tumor sa mga ilaga sa matag grupo gisukod sa usa ka caliper tulo ka beses sa usa ka semana, ug ang gidaghanon sa tumor gikalkulo sa pormula: 0.5 × (lapad) × 2 × ang gitas-on.
Ang pag-analisar sa ekspresyon sa MicroRNA gamit ang miRCURYTM LNA miRNA array, ang ika-7 nga henerasyon adunay, mmu ug rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Denmark) nga naglangkob sa 1119 nga maayo nga gihulagway nga mga ilaga sa taliwala sa 3100 nga mga tawo, mouse ug ilaga nga miRNA capture probes.Atol niini nga pamaagi, ang 250 ngadto sa 1000 ng sa kinatibuk-ang RNA gikuha gikan sa 5′-phosphate pinaagi sa pagtambal sa calf intestinal alkaline phosphatase nga gisundan sa pag-label sa Hy3 green fluorescent dye.Ang mga sample nga gimarkahan dayon gi-hybrid pinaagi sa pagkarga sa mga microarray slide gamit ang hybridization chamber kit (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) ug usa ka hybridization slide kit (Agilent Technologies).Ang Hybridization gihimo sulod sa 16 ka oras sa 56 ° C, dayon ang mga microarray gihugasan sumala sa mga rekomendasyon sa tiggama.Ang giproseso nga microarray slides dayon gi-scan gamit ang Agilent G2565CA microarray scanner system (Agilent Technologies).Ang na-scan nga mga hulagway gi-import gamit ang Agilent Feature Extraction software version 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ug ang fluorescence intensity sa matag hulagway gi-quantified gamit ang katugbang nga GAL file sa giusab nga Exiqon protocol.Ang datos sa Microarray alang sa kasamtangan nga pagtuon gideposito sa database sa GEO ubos sa numero sa pag-access GPL32397.
Ang mga profile sa ekspresyon sa mga hamtong nga exosomal miRNA sa microglia sa RH o ME49 nga mga strain nga nataptan sa Toxoplasma gisusi gamit ang lainlaing mga himan sa network.Ang mga miRNA nga may kalabutan sa pag-uswag sa tumor giila gamit ang miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ug gisala nga adunay normal nga signal intensity (log2) nga labaw sa 8.0.Taliwala sa mga miRNA, ang mga miRNA nga gipahayag nga lahi nakit-an nga labaw pa sa 1.5 ka pilo nga giusab pinaagi sa pag-analisar sa filter sa mga miRNA nga giusab sa mga strain sa RH o ME49 nga nataptan sa T. gondii.
Ang mga selula gipugas sa unom ka atabay nga mga plato (3 x 105 nga mga selula / atabay) sa opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) gamit ang Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).Ang mga nabalhin nga mga selula gikultura sulod sa 6 ka oras ug dayon ang medium giusab ngadto sa bag-ong kompleto nga medium.Ang mga selula anihon 24 oras human sa pagbalhin.
Ang pagtuki sa estadistika kasagarang gihimo gamit ang t-test sa Estudyante gamit ang Excel software (Microsoft, Washington, DC, USA).Alang sa pag-analisar sa eksperimento sa hayop, usa ka two-way ANOVA ang gihimo gamit ang Prism 3.0 software (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Ang P-values ​​<0.05 giisip nga mahinungdanon sa istatistika. Ang P-values ​​<0.05 giisip nga mahinungdanon sa istatistika. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Ang mga kantidad sa P <0.05 giisip nga hinungdanon sa istatistika. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 P ‼< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Ang mga kantidad sa P <0.05 giisip nga hinungdanon sa istatistika.
Ang tanan nga mga eksperimento nga protocol nga gigamit niini nga pagtuon giaprobahan sa Institutional Review Board sa Seoul National University School of Medicine (IRB number SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. ug uban pa.Gibanabana nga global cancer incidence ug mortality sa 2018: GLOBOCAN nga mga tinubdan ug pamaagi.Paghubad.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Usa ka panabut sa mga risgo nga hinungdan sa mga tumor sa utok ug sa ilang mga terapyutik nga interbensyon. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Usa ka panabut sa mga risgo nga hinungdan sa mga tumor sa utok ug sa ilang mga terapyutik nga interbensyon.Rashid, S., Rehman, K. ug Akash, MS Usa ka pagrepaso sa mga hinungdan sa risgo alang sa mga tumor sa utok ug dagkong mga interbensyon sa pagtambal. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Lawom nga pagsabut sa mga hinungdan sa risgo sa tumor sa utok ug mga interbensyon sa pagtambal.Rashid, S., Rehman, K. ug Akash, MS Usa ka pagrepaso sa mga hinungdan sa risgo alang sa mga tumor sa utok ug dagkong mga interbensyon sa pagtambal.Biomedical nga siyensiya.Pharmacist.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Bacterial-viral nga mga interaksyon sa human orodigestive ug female genital tract cancers: Usa ka summary sa epidemiologic ug laboratoryo nga ebidensya. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Bacterial-viral nga mga interaksyon sa human orodigestive ug female genital tract cancers: Usa ka summary sa epidemiologic ug laboratoryo nga ebidensya.Kato I., Zhang J. ug Sun J. Bacterial-viral nga mga interaksyon sa kanser sa gastrointestinal tract sa tawo ug babaye nga genital tract: usa ka summary sa epidemiological ug laboratory data. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用：流行管 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Bacterio-viral interaction sa human oral cavity digestion ug female reproductive tract: summary sa popular nga sakit nga siyensiya ug laboratoryo nga ebidensya.Kato I., Zhang J. ug Sun J. Bacterial-viral nga mga interaksyon sa kanser sa tiyan sa tawo ug kanser sa kinatawo sa babaye: usa ka summary sa epidemiological ug laboratory data.Kanser 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL Gikan sa impeksyon hangtod sa kanser: Giunsa pagbag-o sa mga virus sa tumor sa DNA ang host cell sentral nga carbon ug metabolismo sa lipid. Magon, KL & Parish, JL Gikan sa impeksyon hangtod sa kanser: Giunsa pagbag-o sa mga virus sa tumor sa DNA ang host cell sentral nga carbon ug metabolismo sa lipid.Mahon, KL ug Parish, JL Impeksyon sa sunog sa kanser: kung giunsa pagbag-o sa mga virus sa tumor nga nakabase sa DNA ang host cell sentral nga carbon ug metabolismo sa lipid. Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢。 Magon, KL & Parish, JL Gikan sa impeksyon hangtod sa kanser: giunsa pagbag-o sa mga virus sa tumor sa DNA ang host cell sentral nga carbon ug metabolismo sa lipid.Mahon, KL ug Parish, JL Nagsunog sa impeksyon sa kanser: kung giunsa pagbag-o sa mga virus sa tumor sa DNA ang sentral nga carbon ug metabolismo sa lipid sa mga selula sa host.Bukas nga Biology.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM ug uban pa.Catechol estrogens sa schistosomes ug liver flukes ug helminth-associated cancer.atubangan.init sa sulod.5, 444 (2014).